HBeAg阴性血清中乙肝病毒基本核心启动子和前C区变异研究
作者：世代 文章来源：互联网 点击数： 更新时间：2008-2-29
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【作者】
郭龙华
【导师】
董长垣
【学位授予单位】
武汉大学
【学科专业名称】
病原生物学
【论文级别】
硕士
【出版时间】
2005-4-1
【关键词】
内科学论文,医药学论文
【中文摘要】
乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒科，为不完全环状双链DNA病毒。完整的HBV颗粒为42nm大小的球形颗粒，即Dane颗粒。HBV是目前已知的对人类致病的最小DNA病毒，基因组全长约3.2kb。HBV有四个主要的开放读码框，分别称为S区、C区、P区、X区，有些区是重叠的，HBV这种利用基因组DNA的遗传信息的高效性在自然界中是罕见的。HBV复制过程中要经过逆转录，由于逆转录酶缺乏有效的碱基校对功能，故HBV基因组比一般DNA病毒易发生变异。这给疾病的预防、诊断、治疗和预后带来新问题。 本实验采用裂解液煮沸法提取血清中HBVDNA。该法经过改良后，与碱裂解法和经典的苯酚法进行了效果比较，证实了本改良法具有快速、简便、高效等特点。本研究参照GenBank中的HBV基因组序列，用PrimerPremier5.0软件设计3条定义HBV基本核心启动子(basalcorepromoter,BCP)和前C区(precore，PreC)的特异性引物P1、P2、P3，进行半巢式PCR，扩增16例HBVDNA阳性血清，其中HBeAg阴性血清13例，HBeAg阳性血清3例(作对照)。将PCR产物纯化回收，克隆入pUCm-T载体，利用α互补筛选pUCm-HBV-403重组子，采用PCR和酶切重组子鉴定。通过测序和比对分析HBVBCP和PreC基因序列，发现BCP变异主要集中在TATA样盒的TA1、TA2、TA3，未见插入和缺失突变，与北京董菁的报道显著不同。TA4极为保守，TA4两处均未见变异。BCP中一个变异热点在nt1799位C→G，对于X蛋白来说是同义突变。PreC基因变异主要集中在nt1896位G→A，使第28位密码子TGG→TAG(终止子)，它导致蛋白质翻译提前终止，使HBV不产生HBeAg。本次研究发现一例新奇的插入突变，发生在DR1(directrepeatsequence，DR)内，DR1和DR2在病毒复制和成环过程中起重要作用。 BCP和PreC基因变异可使HBeAg阴转，易使人们对体内HBV掉以轻心。某些BCP和PreC基因位点的变异，可引起严重的肝损害，有些位点的变异影响干扰素的疗效。为提高对HBV的诊治水平，人们应重视对HBVBCP和PreC基因变异的研究。
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12 Lw币
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